痘病毒非结构蛋白拮抗IFN...I介导免疫逃逸机制研究进展_张天琦.pdf

病 毒 学 报 C H IN E S E JO U R N A L O F V IR O L O G Y V ol. 39 N o. 2 M arch 2023 第 39 卷 第 2 期 2 0 2 3 年 3 月 痘 病 毒 非 结 构 蛋 白 拮 抗 I F N I 介 导 免 疫 逃 逸 机 制 研 究 进 展 张 天 琦 1 ，昝 晓 慧 1 ，苏 锐 2 ，王 炜 1* （ 1. 内 蒙 古 大 学 草 原 家 畜 生 殖 调 控 与 繁 育 国 家 重 点 实 验 室 生 命 科 学 学 院 ，呼 和 浩 特 010070；2. 内 蒙 古 蒙 微 生 物 科 技 有 限 公 司 ，呼 和 浩 特 010070） 摘 要 近 些 年 ，猴 痘 病 毒 、牛 结 节 性 皮 肤 病 病 毒 等 痘 病 毒 给 公 共 卫 生 和 畜 牧 业 健 康 发 展 带 来 了 巨 大 危 害 ，引 起 全 球 广 泛 关 注 。 痘 病 毒（ P oxviridae）是 一 种 大 型 双 链 D N A 病 毒 ，宿 主 范 围 广 。 在 与 宿 主 长 期 作 用 过 程 中 ，痘 病 毒 通 过 编 码 非 结 构 蛋 白 来 逃 逸 宿 主 IF N I介 导 的 免 疫 反 应 。 本 文 综 述 了 痘 病 毒 编 码 的 非 结 构 蛋 白 拮 抗 IF N I天 然 免 疫 反 应 的 研 究 进 展 ，为 防 控 痘 病 毒 传 播 提 供 理 论 依 据 ，为 痘 病 毒 新 型 疫 苗 研 发 及 药 物 靶 点 筛 选 提 供 参 考 。 关 键 词 痘 病 毒 ；免 疫 逃 逸 ；天 然 免 疫 ；模 式 识 别 受 体 中 图 分 类 号 Q 93 R 373.9 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 10008721（ 2023）02053910 D O I10.13242/ki.bingduxuebao.004274 痘 病 毒 给 全 球 公 共 卫 生 和 畜 牧 业 健 康 发 展 造 成 巨 大 影 响 。 天 花 病 毒（ V ariola virus，V A R V）这 个 曾 经 让 人 谈 之 色 变 的 痘 病 毒 ，给 人 类 带 来 了 巨 大 灾 难 ， 也 是 人 类 历 史 上 发 现 的 最 具 破 坏 性 的 病 毒 之 一 1 。 尽 管 天 花 病 毒 引 起 的 天 花 已 在 全 球 消 灭 ，然 而 ，痘 病 毒 与 人 类 的 斗 争 远 远 没 有 结 束 ，痘 病 毒 仍 然 严 重 威 胁 着 人 类 和 动 物 健 康 。 2019 年 8 月 ，牛 结 节 性 皮 肤 病 病 毒 传 入 我 国 新 疆 ，并 在 短 时 间 内 波 及 数 省 ，严 重 影 响 我 国 养 牛 业 的 健 康 发 展 24 。 2020 年 以 来 ，牛 结 节 性 皮 肤 病 病 毒 陆 续 传 入 孟 加 拉 、尼 泊 尔 、越 南 、不 丹 、泰 国 等 国 家 ，给 当 地 养 牛 业 造 成 了 巨 大 的 经 济 损 失 4，5 。 猴 痘 疫 情 已 构 成“ 国 际 关 注 的 突 发 公 共 卫 生 事 件 ”，据 W H O 7 月 23 日 报 道 ，2022 年 1 月 1 日 至 2022 年 7 月 20 日 期 间 ，共 有 72 个 国 家 向 世 卫 组 织 报 告 了 14 533 例 猴 痘 病 例 ，包 括 5 例 死 亡 病 例 。 目 前 对 猴 痘 尚 无 特 效 药 或 特 异 性 的 治 疗 方 法 ，给 人 类 健 康 带 来 巨 大 威 胁 6 。 痘 病 毒（ P ox virid ae）可 分 为 感 染 脊 椎 动 物 的 脊 索 病 毒 亚 科（ C hord opox virinae）和 感 染 昆 虫 的 昆 虫 病 毒 亚 科 （ E ntom opox virinae） 7 。 脊 索 病 毒 亚 科 共 18 个 属 8 ，其 中 对 人 畜 危 害 严 重 的 主 要 包 括 正 痘 病 毒 属 （ O rthopox virus） 的 V A R V 、 猴 痘 病 毒 （ M onkeypox virus， M P X V） 、 牛 痘 病 毒 （ C ow pox virus，C P X V） ；山 羊 痘 病 毒 属 （ C apripox virus） 的 牛 结 节 性 皮 肤 病 病 毒 （ L um py skin disease virus， L S D V）、山 羊 痘 病 毒（ G oat pox virus，G T P V）、绵 羊 痘 病 毒 （ S heep pox virus，S P P V） 以 及 副 痘 病 毒 属 （ P arapox virus） 的 羊 口 疮 病 毒 （ O rf virus，O R F V） 、 牛 丘 疹 性 口 炎 病 毒（ B ovine papular stom atitis virus， B P S V） 、 伪 牛 痘 病 毒 （ P seudocow pox virus， P C P V） 7，9，10 。 痘 病 毒 在 电 镜 下 呈 砖 形 或 椭 圆 形 ，病 毒 粒 子 大 小 为 240 300 160 250nm ，为 双 链 D N A 病 毒 ，基 因 组 大 小 为 130 360kb 11 。 病 毒 基 因 组 可 分 为 两 个 不 同 的 功 能 区 域 ，与 病 毒 复 制 相 关 的 基 因 位 于 基 因 组 的 保 守 中 心 区 域 12 ，编 码 D N A 聚 合 酶 、D N A 连 接 酶 、单 链 D N A 结 合 蛋 白 、D N A 依 赖 的 R N A 聚 合 酶 等 ；侧 翼 区 域 编 码 的 蛋 白 决 定 了 病 毒 作 用 的 宿 主 范 围 、病 毒 的 毒 力 ，并 负 责 拮 抗 宿 主 的 免 疫 反 应 等 12 。 宿 主 的 天 然 免 疫 是 识 别 和 抵 抗 病 毒 入 侵 的 第 一 道 防 线 ，通 常 包 括 阻 止 病 原 体 侵 入 的 体 表 屏 障（ 物 理 屏 障 、化 学 屏 障 和 生 物 学 屏 障 ）、天 然 免 疫 细 胞 的 杀 伤 和 调 控（ 包 括 肥 大 细 胞 、嗜 中 性 粒 细 胞 、巨 噬 细 胞 、 树 突 状 细 胞 、N K 细 胞 等 ）、体 液 中 的 天 然 免 疫 分 子 （ 包 括 天 然 抗 体 、乳 铁 蛋 白 、防 御 素 等 ）清 除 病 原 体 、 诱 导 天 然 免 疫 反 应 及 炎 症 反 应 等 13 。 病 原 体 侵 入 机 体 和 机 体 对 病 原 体 的 识 别 、杀 伤 与 清 除 是 宿 主 与 病 原 长 期 互 作 形 成 的 机 制 ，病 毒 通 过 自 身 编 码 的 蛋 白 来 中 和 抗 体 、抑 制 干 扰 素 或 趋 化 因 子 ，从 而 削 弱 免 疫 收 稿 日 期 20220624； 接 受 日 期 20221111 基 金 项 目 内 蒙 古 自 治 区“ 揭 榜 挂 帅 ”项 目 （ 项 目 号 2022JB G S 0004） ，题 目 牛 结 节 皮 肤 病 标 记 疫 苗 及 其 配 套 鉴 别 诊 断 试 剂 盒 开 发 。 作 者 简 介 张 天 琦（ 1999），女 ，主 要 从 事 动 物 病 原 生 物 学 及 防 控 技 术 研 究 ，E m ail846602544 通 讯 作 者 王 炜（ 1980），男 ，教 授 ，主 要 从 事 动 物 病 原 生 物 学 及 防 控 技 术 研 究 ，E m ailw angw ei im 开 放 科 学 （ O S I D） 病 毒 学 报 39 卷 反 应 ，实 现 免 疫 逃 逸 。 干 扰 素 （ Interferon，IF N） 是 抗 病 毒 反 应 的 标 志 性 效 应 物 ，对 于 启 动 天 然 免 疫 反 应 和 抵 御 痘 病 毒 入 侵 至 关 重 要 14 。 本 文 就 目 前 痘 病 毒 对 IF N I天 然 免 疫 反 应 逃 逸 的 方 式 进 行 综 述 ，为 进 一 步 研 究 痘 病 毒 的 致 病 机 理 及 防 治 提 供 理 论 支 持 ，为 新 型 痘 病 毒 疫 苗 研 发 及 药 物 靶 点 筛 选 提 供 参 考 。 1 干 扰 素 的 产 生 机 制 宿 主 的 模 式 识 别 受 体 （ P attern recognition receptors，P R R s）识 别 病 原 相 关 分 子 模 式（ P athogen associated m olecular patterns，P A M P s），通 过 信 号 转 导 过 程 ，启 动 IF N 的 抗 病 毒 作 用 。 这 些 P R R 包 括 T oll样 受 体 （ T olllike receptor，T L R） 、R IG 样 受 体 （ R IG like receptor，R L R） 和 N O D 样 受 体 （ N O D like receptor，N L R）等 15 ，最 终 激 活 基 因 结 合 核 因 子（ N uclearfactorgenebinding，N F B）信 号 通 路 或 促 使 干 扰 素 调 节 因 子 （ Interferon regulatory factor， IR F）的 转 录 ，N F B 诱 导 促 炎 因 子 和 IF N 的 产 生 ， IR F 转 位 入 核 并 促 使 IF N 表 达 。 1 .1 P R R s 的 配 体 识 别 机 制 P A M P 来 源 于 病 原 体 保 守 的 分 子 结 构 ，包 括 脂 质 、蛋 白 质 和 核 酸 ，如 脂 多 糖 、脂 磷 壁 酸 、脂 蛋 白 和 细 菌 D N A 13 。 位 于 细 胞 表 面 或 胞 质 内 的 P R R s 识 别 P A M P s，激 活 不 同 的 信 号 通 路 ，刺 激 IF N 的 产 生 。 其 中 T L R 通 过 富 含 亮 氨 酸 重 复 序 列 的 胞 外 结 构 域 识 别 P A M P s，R L R 通 过 C 端 结 构 域 识 别 并 结 合 病 毒 R N A ，cG A S 识 别 并 结 合 胞 质 溶 胶 中 病 毒 产 生 的 dsD N A 13，16 ，D N A P K 通 过 K u 异 二 聚 体 识 别 病 毒 D N A 17 。 1 .2 N F B 的 激 活 机 制 N F B 可 以 诱 导 促 炎 介 质 和 I 型 干 扰 素 的 产 生 。 N F B 通 常 以 p65 和 p50 组 成 的 异 二 聚 体 形 式 存 在 于 细 胞 质 ，当 细 胞 处 于 静 息 状 态 时 ，N F B 在 细 胞 质 中 与 IB 结 合 ，处 于 非 活 化 状 态 。 受 到 外 界 信 号 刺 激 后 ，IB 被 降 解 ，N F B 解 除 束 缚 ，转 位 进 入 核 内 激 活 靶 基 因 的 转 录 18 。 T L R 在 衔 接 蛋 白 髓 样 分 化 因 子 88（ M yeloid differentiation prim ary response gene 88，M yD 88） 的 帮 助 下 启 动 信 号 通 路 。 M yD 88 由 T L R 分 子 胞 内 结 构 域 （ T ollinterleukin1 receptor dom ain，T IR） 和 死 亡 结 构 域 （ D eath dom ain，D D） 构 成 ，通 过 同 型 互 作 与 T L R 相 互 作 用 ，启 动 信 号 转 导 。 并 通 过 D D 结 构 域 招 募 同 样 带 有 D D 结 构 域 的 分 子 ，如 白 细 胞 介 素 受 体 相 关 激 酶 （ Interleukin receptor associated kinase，IR A K） 等 ，进 而 启 动 核 因 子 B 激 酶 抑 制 剂 （ Inhibitor of kappa B kinase，IK K）复 合 体 相 关 途 径 ， 最 后 激 活 N F B 通 路（ 图 1 通 路 1） 13，18，19 。 视 黄 酸 （ 维 甲 酸 ） 诱 导 基 因 I（ R etinoic acid inducible gene I，R IG I） 是 胞 质 中 识 别 病 毒 dsR N A 的 感 知 元 件 ，带 有 效 应 结 构 域 C A R D 18 。 可 与 胞 质 中 同 样 带 有 C A R D 结 构 域 的 线 粒 体 抗 病 毒 信 号 转 导 蛋 白 （ M itochondrial antiviral signaling，M A V S） 同 型 互 作 ，使 M A V S 聚 合 并 活 化 ，激 活 N F B 信 号 途 径 和 T B K 1，后 者 使 IR F 3 和 IR F 7 激 活 ，产 生 IF N I （ 图 1 通 路 2）。 干 扰 素 基 因 刺 激 因 子 （ S tim ulator of interferon gene，S T IN G）是 内 质 网 上 的 一 种 跨 膜 分 子 ，为 无 活 性 同 源 二 聚 体 ，在 环 鸟 苷 酸 腺 苷 酸 合 成 酶 （ C yclic G M P A M P synthase，cG A S） 的 帮 助 下 识 别 并 结 合 胞 质 中 病 毒 产 生 的 dsD N A ，催 化 A T P 和 G T P 结 合 形 成 cG A M P ，后 者 与 S T IN G 结 合 ，使 S T IN G 构 象 发 生 改 变 ，招 募 并 激 活 T A N K 激 活 激 酶 1（ T R A F fam ily m em berassociated N F B activator binding kinase 1，T B K 1），激 活 N F B 通 路 ，促 使 I型 干 扰 素 基 因 表 达（ 图 1 通 路 3） 13 。 1 .3 I R F 的 激 活 机 制 干 扰 素 调 节 因 子 （ Interferon regulatory factor， IR F） 对 IF N I、IS G 的 表 达 调 控 具 有 重 要 意 义 20 。 已 有 研 究 表 明 ，病 毒 感 染 宿 主 后 ，IR F 3 和 IR F 7 分 别 与 组 蛋 白 转 乙 酰 化 酶 p300/C B P 和 p300/C B P 相 关 因 子 相 互 作 用 ，IR F 通 过 位 于 羧 基 端 的 含 有 多 个 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 残 基 的 蛋 白 磷 酸 化 ，易 位 到 核 内 ，激 活 IF N 的 表 达 20 。 cG A S S T IN G 对 于 诱 导 IR F 的 磷 酸 化 至 关 重 要 。 在 感 染 改 良 的 痘 苗 病 毒 安 卡 拉 （ M odified vaccinia virus A nkara，M V A） 时 ，与 野 生 型 小 鼠 相 比 ，cG A S S T IN G 缺 失 的 小 鼠 中 I 型 IF N 表 达 降 低 ，T B K 1 和 IR F 磷 酸 化 水 平 下 降 19 。 证 实 了 cG A S S T IN G 对 I 型 IF N 的 产 生 及 IR F 的 磷 酸 化 的 重 要 性（ 图 1 通 路 4、5）。 D N A P K 由 K u70、K u80 和 D N A P K cs 组 成 ，是 负 责 D N A 损 伤 修 复 过 程 中 非 同 源 性 末 端 接 合 反 应 的 关 键 性 酶 17 。 K u70、K u80 形 成 的 异 二 聚 体 是 与 D N A 结 合 的 部 位 ，K u70 诱 导 IF N 的 产 生 ，此 过 程 与 IR F 的 参 与 密 不 可 分（ 图 1 通 路 6） 21 。 1 .4 I F N 诱 导 I S G s 产 生 的 机 制 I型 干 扰 素 分 泌 后 ，通 过 自 分 泌 或 旁 分 泌 与 细 胞 表 面 的 干 扰 素 受 体（ Interferon receptor，IF N R）快 速 结 合 ，将 信 号 传 递 至 细 胞 内 部 ，启 动 JA K /S T A T 信 540 2 期 张 天 琦 ，等 . 痘 病 毒 非 结 构 蛋 白 拮 抗 IF N I介 导 免 疫 逃 逸 机 制 研 究 进 展 号 通 路 ，诱 导 IS G s 的 表 达 ，发 挥 抗 病 毒 作 用 。 IF N R 与 Janus 激 酶（ Janus kinase，JA K）结 合 ，使 胞 内 JA K 相 互 靠 拢 从 而 磷 酸 化 受 体 分 子 胞 内 区 的 酪 氨 酸 残 基 。 磷 酸 化 的 酪 氨 酸 结 合 S H 2 结 构 域 ，并 将 带 有 S H 2 结 构 域 的 信 号 转 导 与 转 录 激 活 子 （ S ignal transducer and activator of transcription，S T A T）招 募 到 胞 膜 内 侧 并 磷 酸 化 S T A T 分 子 中 的 酪 氨 酸 ，磷 酸 化 的 S T A T 形 成 同 源 二 聚 体 ，与 IR F 9 结 合 形 成 干 扰 素 刺 激 因 子 3（ IF N stim ulated gene factor 3， IS G F 3），促 进 干 扰 素 激 活 反 应 元 件（ IF N stim ulated response elem ents， IS R E） 和 干 扰 素 刺 激 基 因 （ Interferonstim ulated genes IS R E ，IS G s）的 转 录 ，并 表 达 蛋 白 激 酶 R（ P rotein kinase R ，P K R）、25寡 聚 腺 苷 酸 合 成 酶 （ 2 5 oligoadenylate synthetases， O A S） 等 蛋 白 ，这 些 蛋 白 可 以 识 别 病 毒 复 制 后 期 或 转 录 过 程 中 产 生 的 dsR N A ，激 活 相 关 信 号 通 路 ，发 挥 抗 病 毒 功 能（ 图 1 通 路 9） 22 。 在 各 类 IS G 中 ，IS G 15 诱 导 免 疫 反 应 速 度 最 快 、 诱 导 免 疫 反 应 能 力 最 强 。 有 研 究 表 明 ，IS G 15 可 以 直 接 抑 制 病 毒 复 制 ，调 节 宿 主 免 疫 反 应 23 ，也 可 以 作 为 免 疫 调 节 蛋 白 来 调 控 宿 主 的 反 应 24 。 P K R 25，26 与 O A S R N aesL 27，28 均 可 与 dsR N A 相 互 作 用 ，P K R 的 激 活 降 低 了 核 因 子 B 抑 制 物（ Inhibitor of nuclear factor kappa B ，IB）的 蛋 白 水 平 ，从 而 激 活 N F B 通 路 ，行 使 抗 病 毒 功 能 。 激 活 的 O A S R N aseL 裂 解 m R N A 和 rR N A ，抑 制 蛋 白 质 合 成 ，一 些 R N A 传 感 器 识 别 R N A 裂 解 物 ，行 使 抗 病 毒 功 能 （ 图 1 通 路 7、8） 28 。 2 痘 病 毒 拮 抗 I F N 产 生 的 主 要 机 制 为 阻 止 干 扰 素 的 抗 病 毒 作 用 ，痘 病 毒 编 码 多 种 蛋 白 拮 抗 细 胞 内 的 信 号 通 路（ 表 1）。 研 究 表 明 ，痘 病 毒 编 码 蛋 白 可 以 通 过 拮 抗 N F B 信 号 通 路 抑 制 IF N 的 产 生 ，如 O R F V 121 通 过 抑 制 p65 核 易 位 拮 抗 N F B 通 路 、痘 苗 病 毒 （ V accinia virus，V A C V） F 14 通 过 抑 制 P 65 乙 酰 化 拮 抗 N F B 通 路 、V A C V B 14 与 IK K 复 合 物 相 互 作 用 使 N F B 一 直 处 于 失 活 状 态 ；一 些 蛋 白 通 过 抑 制 IR F 的 激 活 抑 制 IF N 的 产 生 ，如 V A C V C 6 通 过 抑 制 IK K 的 激 活 及 IR F 3 的 易 位 和 激 活 ，从 而 抑 制 IF N 的 产 生 ；一 些 蛋 白 通 过 抑 制 IS G s 信 号 通 路 发 挥 作 用 ，如 V A C V V H 1 使 S T A T 1 和 S T A T 2 去 磷 酸 化 、V A C V D 9、D 10、E 3 可 以 直 接 阻 断 IS G s 的 抗 病 毒 功 能 。 2 .1 痘 病 毒 通 过 拮 抗 N F B 通 路 抑 制 I F N 的 产 生 N F B 是 机 体 抵 御 痘 病 毒 入 侵 的 关 键 因 素 ，痘 病 毒 编 码 多 种 蛋 白 影 响 N F B 的 抗 病 毒 作 用 。 V A C V 是 用 于 预 防 天 花 的 活 疫 苗 毒 株 ，在 痘 病 毒 编 码 蛋 白 与 宿 主 互 作 研 究 方 面 最 为 深 入 29 。 V A C V A 46 和 A 52 与 T IR 结 构 域 氨 基 酸 序 列 具 有 相 似 性 ， 可 以 干 扰 T L R 3 的 信 号 传 导 ，干 扰 N F B 的 激 活 ， A 52 还 可 以 与 肿 瘤 坏 死 因 子 受 体 相 关 因 子 6 （ T um our necrosis factor receptor associated factor 6，T R A F 6） 和 IR A K 相 互 作 用 30，31 。 V A C V K 7 与 A 52 具 有 序 列 相 似 性 ，同 样 也 可 以 作 用 于 IR A K 2 和 T R A F 6，并 抑 制 IL 1 介 导 的 N F B 的 激 活 32 。 有 研 究 表 明 ，L S D V 150 和 L S D V 156 与 V A C V A 52R 具 有 相 似 性（ 图 1 通 路 1） 33 。 V A C V E 3 是 一 种 高 度 保 守 的 蛋 白 ，在 感 染 早 期 表 达 ，通 过 C 端 的 dsR N A 结 合 结 构 域 抑 制 poly （ dA dT）的 信 号 传 导 ，阻 断 病 毒 复 制 过 程 中 产 生 的 dsR N A ，阻 止 R IG I 的 激 活 34 。 研 究 表 明 ，富 含 A T 的 dsD N A 被 D N A 依 赖 性 R N A 聚 合 酶 （ D N A dependent R N A polym erase ， P ol ） 转 录 为 R N A ，诱 导 产 生 IF N I 并 激 活 N F B 35，36 。 因 此 ， V A C V E 3 可 以 拮 抗 P ol 诱 导 的 抗 病 毒 作 用 。 M P X V F 3 蛋 白 同 样 包 含 C 端 dsR N A 结 合 域 ，与 V A C V E 3 蛋 白 具 有 氨 基 酸 同 源 性（ 图 1 通 路 2） 37 。 V A C V B 2R 基 因 编 码 的 免 疫 核 酸 酶（ poxins）属 于 23cG A M P 特 异 性 降 解 酶 家 族 ，与 野 生 型 V A C V 相 比 ，poxins 缺 失 的 V A C V 突 变 株 感 染 的 细 胞 内 IF N 水 平 并 没 有 增 加 ，这 表 明 poxins 通 过 降 解 23cG A M P 限 制 S T IN G 依 赖 的 信 号 转 导 ，逃 避 cG A S S T IN G 对 D N A 的 感 知 38 ，但 并 不 阻 止 下 游 效 应 蛋 白 的 产 生 。 V A C V B 14 与 IK K 复 合 物 相 互 作 用 ，抑 制 IB 的 磷 酸 化 ，使 N F B 一 直 处 于 失 活 状 态 39 。 与 此 相 似 ，V A C V K 1 通 过 抑 制 IB 的 降 解 来 抑 制 宿 主 N F B 的 激 活 40 ，此 外 ，V A C V K 1 和 黏 液 瘤 病 毒 （ M yxom a virus，M Y X V） M 150 可 作 为 N F B 核 内 抑 制 剂 发 挥 拮 抗 作 用 41 。 M V A 编 码 的 M 2 蛋 白 可 以 降 低 E R K 2 的 磷 酸 化 ，抑 制 p65 核 易 位 和 N F B 的 激 活 42 。 最 近 研 究 发 现 ，V A C V F 14 蛋 白 可 以 通 过 抑 制 P 65 乙 酰 化 拮 抗 N F B 通 路 （ 图 1 通 路 3） 43 。 在 利 用 O R F V 121 作 为 插 入 位 点 构 建 表 达 猪 流 行 性 腹 泻 病 毒 （ P orcine epidem ic diarrhea virus， P E D V） S 蛋 白 的 O R F V P E D V S 病 毒 时 发 现 ， O R F V 121 编 码 了 一 种 可 以 干 扰 N F B p65 磷 酸 化 及 核 易 位 的 蛋 白 41 。 O R F V 002 在 细 胞 核 中 结 合 N F B p65 并 抑 制 其 乙 酰 化 ，O R F V 024 通 过 靶 向 541 病 毒 学 报 39 卷 IK K 复 合 物 抑 制 IB 的 磷 酸 化 ，抑 制 N F B 的 激 活 。 O R F V 121 缺 陷 型 突 变 株 可 以 使 患 病 羊 的 数 量 显 著 减 少 ，但 O R F V 002 缺 陷 型 突 变 株 和 O R F V 024 缺 陷 型 突 变 株 的 患 病 羊 数 量 并 无 明 显 减 少 ，这 表 明 O R F V 121 是 关 键 毒 力 因 子 ，O R F V 121 抑 制 N F B p65 的 磷 酸 化 和 核 易 位 拮 抗 宿 主 天 然 免 疫 反 应 （ 图 1 通 路 3） 44 。 痘 病 毒 可 直 接 与 N F B 通 路 相 互 作 用 。 通 过 构 建 C P X V 006 缺 失 的 毒 株 ，并 观 察 N F B 的 激 活 及 核 定 位 得 出 ，C P X V 006 与 N F B 直 接 相 互 作 用 并 阻 止 N F B 的 释 放 和 核 易 位（ 图 1 通 路 3） 45 。 2 .2 痘 病 毒 通 过 抑 制 I R F 激 活 抑 制 I F N 的 产 生 IR F 是 诱 导 IF N 产 生 的 关 键 成 分 ，研 究 表 明 ， V A C V 、G T P V 、V A R V 都 可 以 抑 制 痘 病 毒 诱 导 的 IR F 的 激 活 ，如 V A C V C 6、K 7、N 1、N 2、C 4 和 C 16 蛋 白 ，G T P V 135 蛋 白 。 V A C V C 6 通 过 阻 断 T B K 1 和 IK K 的 激 活 抑 制 IR F 3 的 易 位 和 激 活 ，从 而 抑 制 IF N 的 产 生 ，但 不 抑 制 N F B 和 独 立 于 T B K 1 和 IK K 的 IR F 的 激 活 46 。 与 C 6 相 同 ，V A C V K 7 通 过 抑 制 T B K 1/IK K 介 导 的 IR F 激 活 来 抑 制 IF N 的 产 生 32 。 V A C V N 1 通 过 影 响 T B K 1 和 IR F 3 的 激 活 ，阻 止 IF N 的 产 生 19，47 。 G T P V 135 蛋 白 与 V A C V N 1 蛋 白 有 相 同 的 作 用 39 。 V A C V N 2 抑 制 T B K 1 下 游 的 IR F 3，在 IR F 3 易 位 到 细 胞 核 后 起 抑 制 作 用 ，这 点 在 小 鼠 感 染 模 型 中 得 到 证 实 ，N 2L 基 因 缺 失 的 V A C V 突 变 株 在 细 胞 中 可 以 正 常 的 复 制 和 感 染 ，但 与 野 生 株 相 比 ，突 变 株 V A C V 可 以 导 致 小 鼠 病 症 减 轻 ，证 实 了 N 2 蛋 白 可 以 抑 制 细 胞 核 内 IR F 3 活 性（ 图 1 通 路 5） 48 。 V A C V C 4 和 C 16 蛋 白 靶 向 D N A P K 介 导 的 信 号 通 路 。 V A C V C 4 和 C 16 可 以 直 接 与 D N A P K 的 K u 异 二 聚 体 相 互 作 用 ，阻 断 K u 异 二 聚 体 与 D N A 的 结 合 ，降 低 IR F 3 磷 酸 化 水 平 ，干 扰 D N A P K 对 病 毒 D N A 的 感 知 ，减 少 IF N 的 产 生 17，49，50 。 V A R V 中 C 16 有 相 同 的 作 用（ 图 1 通 路 6） 17 。 2 .3 痘 病 毒 抑 制 I S G 的 产 生 一 方 面 ，痘 病 毒 可 以 阻 止 IF N 与 其 受 体 的 结 合 ，从 而 抑 制 IS G 的 产 生 。 V A C V B 8 与 IF N 受 体 的 胞 外 结 构 域 相 似 ，通 过 与 IF N R 的 结 合 抑 制 IF N 信 号 转 导 39 。 与 此 相 似 的 有 V A C V B 19，此 蛋 白 与 I 型 IF N 受 体 具 有 氨 基 酸 相 似 性 ，须 注 意 的 是 并 非 所 有 V A C V 毒 株 都 会 编 码 此 蛋 白 39 。 V A C V B 18 是 一 种 IF N I 结 合 蛋 白 ，可 以 通 过 糖 胺 聚 糖 （ G lycosam inoglycans，G A G s） 与 细 胞 表 面 结 合 ，隔 离 IF N I，能 够 阻 止 未 感 染 细 胞 中 IF N 介 导 的 抗 病 毒 状 态（ 图 1 通 路 9） 51 。 另 一 方 面 ，痘 病 毒 可 以 阻 断 JA K S T A T 信 号 通 路 拮 抗 宿 主 天 然 免 疫 反 应 。 如 V A C V V H 1、 O R F V 057、V A R V B 17 和 M P X V B 16 均 可 以 通 过 使 S T A T 去 磷 酸 化 抑 制 IS G 的 产 生 ，阻 止 IF N 发 挥 作 用 。 V A C V V H 1 是 一 种 与 病 毒 粒 子 相 关 的 磷 酸 酶 ， 由 病 毒 粒 子 带 入 受 感 染 细 胞 ，并 迅 速 使 S T A T 1 和 S T A T 2 去 磷 酸 化 ，从 而 抑 制 来 自 IF N R 的 所 有 信 号 转 导 ，阻 断 IF N 与 其 受 体 结 合 51 。 O R F V 057 编 码 与 V A C V V H 1 同 源 的 蛋 白 ，使 S T A T 去 磷 酸 化 阻 断 IS G 的 表 达 52 。 最 新 研 究 通 过 pulldow n 实 验 证 实 了 V A C V W R 感 染 过 程 中 018 基 因 编 码 的 一 个 未 确 定 特 征 的 蛋 白 与 S T A T 1 的 相 互 作 用 ，抑 制 了 IF N 的 抗 病 毒 作 用（ 图 1 通 路 9） 49 。 与 使 用 IF N 处 理 的 H eL a 细 胞 相 比 ，与 V A C V B 18、V A R V B 17 和 M P X V B 16 蛋 白 共 同 孵 育 的 H eL a 细 胞 均 未 显 示 S T A T 磷 酸 化 ，这 表 明 V A R V B 17 和 M P X V B 16 均 可 阻 断 IF N 诱 导 的 信 号 通 路 ， 抑 制 IF N I 诱 导 的 信 号 传 导 53 。 T P V Y 136 与 V A C V B 18 具 有 27 的 氨 基 酸 同 源 性 ，T P V Y 136 可 以 抑 制 所 有 I 型 和 III 型 IF N 诱 导 的 信 号 转 导 ，但 T P V Y 136 具 体 作 用 位 置 未 知（ 图 1 通 路 9） 54 。 最 后 ，痘 病 毒 可 以 直 接 阻 断 IS G s 的 抗 病 毒 功 能 。 如 V A C V D 9、D 10、E 3 和 O R F V 20 通 过 阻 止 dsR N A 的 产 生 阻 止 P K R 和 O A S 抗 病 毒 作 用 ， V A C V E 3、K 3、C 7 和 L S D V 014、034 蛋 白 可 以 作 为 竞 争 性 抑 制 剂 阻 止 P K R 作 用 。 有 实 验 表 明 ，V A C V D 9 和 D 10 失 活 可 以 增 强 P K R 诱 导 的 真 核 翻 译 起 始 因 子 2（ E ukaryotic translation initiation factor 2，eIF 2） 磷 酸 化 ，并 增 强 V A C V 感 染 期 间 P K R 和 O A S /R N aseL 介 导 的 抗 病 毒 反 应 55 。 V A C V D 9 和 D 10 都 包 含 N udix/M utT 基 序 ，并 借 助 N udix/M utT 基 序 切 割 m 7 G pppN m cap，从 而 使 R N A 暴 露 于 外 切 酶 ，降 低 m R N A 的 稳 定 性 ，减 少 dsR N A 的 积 累 ，阻 止 P K R 的 激 活 、抑 制 O A S /R N aseL 介 导 的 抗 病 毒 反 应（ 图 1 通 路 7） 55 。 在 B H K 细 胞 中 ，当 没 有 IF N 处 理 时 ，V A C V K 3 的 表 达 水 平 超 过 了 细 胞 内 P K R 的 水 平 ，使 K 3 可 以 作 为 竞 争 性 抑 制 剂 阻 止 P K R 的 激 活 56 。 V A C V K 3 与 eIF 2 的 氨 基 酸 末 端 结 构 域 具 有 同 源 性 ，是 eIF 2 磷 酸 化 的 竞 争 性 抑 制 剂 ，从 而 阻 断 P K R 通 路 56 。 此 外 ，V A C V C 7 也 参 与 了 抑 制 eIF